Aula Espectrofotômetros e Leitores de ELISA | Equipamentos | Preparatório Biomédico | Concurso

Aula Espectrofotômetros e Leitores de ELISA | Equipamentos | Preparatório Biomédico | Concurso Conteúdo Espectrofotômetros e Leitores de ELISA Prof. Dr. Victor Proença Espectrofotômetro  Mede e compara a quantidade de luz (energia radiante) absorvida por uma determinada solução.  Quanto maior a absorbância, maior a concentração da substância = Lei de Lambert-Beer  Usos: bioquímica, imunologia etc. Partes do Espectrofotômetro  Fonte de Luz: lâmpada de deutério (UV) e lâmpada de tungstênio (visível)  Monocromador: transforma a luz em monocromática  Cubeta: recipiente da amostra (quartzo, vidro e acrílico)  Detector: dispositivo que detecta a fração de luz que passou pela amostra Equação de Lambert-Beer  A = εbc  A = absorvância (medida pelo espectrofotômetro);  ε = constante molar de absorção (característica de cada espécie química);  b = profundidade de penetração da luz (dependente do comprimento de onda da luz utilizada e do tipo de cubeta);  c = concentração da solução (expressa em mol/L ou g/L, dependendo do tipo de solução). Absorvância  Absorvância (A) = medida da quantidade de luz que é absorvida pela solução.  Relação entre a intensidade da luz que entra na solução (Io) e a intensidade da luz que sai da solução (I) (A = log10(Io/I)).  Diretamente proporcional à concentração da solução e à constante molar de absorção da espécie química presente na solução. Transmitância  Transmitância (T) = medida da quantidade de luz que é transmitida pela solução.  Relação entre a intensidade da luz que sai da solução (I) e a intensidade da luz que entra na solução (Io) (T = I/Io).  Inversamente proporcional à concentração da solução e à constante molar de absorção da espécie química presente na solução. Branco  Branco é importante para que as medidas de absorbância das amostras possam ser comparadas ao valor de referência (absorbância zero)  Permite determinar a concentração da substância absorvente presente na amostra.  Solução de "branco= estabelece uma referência para a medida da absorbância.  Branco não contém a substância que se deseja medir; é utilizada para estabelecer um valor de referência para a medida de absorbância.